Sample Ntụle mmalite na-agbanwe agbanwe: 2-400 μg ịdị ọcha dị elu nwere ike wepụta DNA site na 0.1-20 ml nke nlele ọbara dị iche iche.
■ Nchekwa na ntụkwasị obi: Enweghị mmetọ ihe mgbaze anụ ahụ dịka phenol/chloroform.
Kwesịrị ekwesị maka ngwa dị iche iche oge niile, dị ka mgbaze mgbaze, PCR, iwu ọbá akwụkwọ, Southern blot (ngwakọta ngwakọta nke usoro dị elu), wdg.
Enwere ike ịhazi ngwaahịa niile maka ODM/OEM. Maka nkọwa,biko pịa Ọrụ ahaziri (ODM/OEM)
Ọcha nke genomic DNA site na 300 μl, 5 ml na 10 ml ọbara anticoagulation mmadụ na EDTA site na iji sistemụ DNA RelaxGene. Ejiri 3 μl nke 200 μl, 500 μl na 1 ml eluates n'otu n'otu. M: TIANGEN Marker D15000. Nsonaazụ nnwale: 0.1-20 ml ọbara nwere ike ị nweta site na sistemụ DNA RelaxGene nwere ezigbo ahịrị. |
|
Nkọwa nke genomic DNA ewepụtara na 300 μl anticoagulation mmadụ na EDTA site na iji sistemụ DNA RelaxGene yana ngwaahịa ndị ọzọ sitere na ndị na -eweta ngwaahịa. M: TIANGEN Marker D15000. Ejiri 3 μl nke 200 μl eluates kwa otu ụzọ. Nsonaazụ nnwale: Tụnyere ndị na -ebunye ndị ọzọ, sistemụ DNA RelaxGene nwere ike nweta mkpụrụ dị elu, ịdị ọcha na ịdị n'otu nke ọbara gDNA. |
|
Enwetara DNA mkpụrụ ndụ ihe nketa site na nlele ọbara site na iji sistemụ DNA RelaxGene. Ihe nlele: 300 μl ọbara anticoagulation mmadụ nwere EDTA, EDTA/NaF, heparin na sodium citrate; akwa mkpuchi sitere na ọbara 2 ml; Ọbara ọkụkọ 10 μl na ọbara oke 200 μl. Ejiri 3 μl nke 200 μl eluates kwa otu ụzọ. M: TIANGEN Marker D15000. Nsonaazụ nnwale: Enwere ike itinye sistemụ DNA RelaxGene n'ọtụtụ ebe na ịdị ọcha DNA dị elu nke ọgwụ anticoagulants mmadụ nwere ọgwụgwọ dị iche iche yana ọbara sitere n'ụdị dị iche iche. |
|
Nkọwa Ozi Ndị Ọzọ |
A.
A-2 Lysis ezughi oke nke nlele ahụ-Agaghị agwakọta ihe nlele ahụ nke ọma na ihe nchekwa lysis. A na-atụ aro ka agwakọta ya nke ọma site na pulse-vortexing maka ugboro 1-2. —Ndị lysis sel na -ezughị ezu sitere na mbelata ọrụ proteinase K. -Ihe ezughi oke cell lysis ma ọ bụ mbibi protein n'ihi ezughị oke ịsa ahụ ọkụ. A na -atụ aro ka ebipụ anụ ahụ n'ime obere iberibe ma gbatịkwuo oge ịsa ahụ iji wepu ihe niile fọdụrụ na lysate.
A-3 mgbasa ozi DNA ezughi oke. —Enweghị ethanol ma ọ bụ pasent dị ala karịa 100% ethanol tupu agbakwunye lysate na kọlụm ogho.
A-4 Uru pH nke ịkwa iko na-adị oke ala. Gbanwee pH n'etiti 8.0-8.3.
Ethanol fọdụrụnụ dị n'elu.
- Enwere ihe nchekwa ịsa ahụ PW dị elu. Enwere ike wepu ethanol site na ịgbanye kọlụm maka nkeji 3-5, wee tinye ya na ụlọ okpomọkụ ma ọ bụ incubator 50 for maka nkeji 1-2.
A-1 Ihe nlele ahụ abụghị nke ọhụrụ. - Wepụta DNA nlele dị mma ka ọ bụrụ akara iji chọpụta ma DNA dị na nlele ahụ emebiela.
A-2 ọgwụgwọ tupu ọgwụgwọ adịghị mma. —N'ihi na ọ na -egwepịa mmiri nitrogen dị oke mmiri, iweghachite mmiri, ma ọ bụ oke nlele.
Nhazi ọkwa kwesịrị ịdị iche iche maka nlele dị iche iche. Maka nlele osisi, gbaa mbọ hụ na igwu mmiri nitrogen dị mmiri mmiri. Maka nlele anụmanụ, homogenate ma ọ bụ gwuo nke ọma na nitrogen mmiri mmiri. Maka nlele nwere mgbidi selụ nke siri ike imebi, dịka nje bacteria G+ na yist, a na -atụ aro ka ị jiri lysozyme, lyticase ma ọ bụ ụzọ igwe iji mebie mgbidi sel.
4992201/4992202 Osisi Genomic DNA Kit na-anabata usoro dabere na kọlụm nke chọrọ chloroform maka mmịpụta ya. Ọ dabara nke ọma maka nlele osisi dị iche iche, yana ntụ ntụ akọrọ. Ngwa Hi-DNAsecure Plant Kit bụkwa nke dabere na kọlụm, mana na-enweghị mkpa mmịpụta phenol/chloroform, na-eme ka ọ dị mma na anaghị egbu egbu. Ọ dabara maka osisi nwere polysaccharides dị elu na ọdịnaya polyphenol. 4992709/4992710 DNAquick Plant System na-anabata usoro dabere na mmiri. Mwepu Phenol/chloroform adịghị mkpa. Usoro nsacha dị mfe na ngwa ngwa na -enweghị oke maka mbido mbido nlele, yabụ ndị ọrụ nwere ike ịhazigharị ego ahụ n'ụzọ dị mfe dịka ihe nnwale chọrọ si dị. Enwere ike nweta nnukwu iberibe gDNA nwere nnukwu mkpụrụ.
Enwere ike ịme mwepụ DNA nke ọbara site na iji reagents enyere na ngwa abụọ a site na ịgbanwere usoro ahụ na ntuziaka akọwapụtara maka mmịpụta DNA ọbara. Enwere ike ịnye akwụkwọ dị nro nke usoro mmịpụta DNA na -egbochi ọbara mgbe ị rịọrọ.
Kwụsị ihe nlele ọhụrụ na 1 ml PBS, saline nkịtị ma ọ bụ nchekwa TE. Kpochapụrụ ihe nlele ahụ nke ọma site na homogenizer ma na -anakọta mkpali na ala nke tube site na centrifuging. Wepu ihe dị elu, wee jiri mbughari 200 GAl ga -ebughachi mmiri ozuzo. Enwere ike ịme nsacha DNA na -esote dịka ntuziaka ahụ si dị.
Maka ịdị ọcha nke gDNA na plasma, ọbara na ihe nlebara ahụ, a na -atụ aro TIANamp Micro DNA Kit. Maka ịdị ọcha nke nje gDNA site na nlele ọbara/plasma, a na -atụ aro TIANamp Virus DNA/RNA Kit. Maka ịdị ọcha nke gDNA nje site n'ọbara na nlele plasma, a na -atụ aro TIANamp Bacteria DNA Kit (ekwesịrị itinye lysozyme maka nje dị mma). Maka nlele mmiri, a na-atụ aro Hi-Swab DNA Kit na TIANamp Bacteria DNA Kit.
A na -atụ aro Kit Kit DNAsecure ma ọ bụ Sistemụ Pụkụkụ DNA maka iwepụta mkpụrụ ndụ ihe nketa fungal. Maka mmịpụta mkpụrụ ndụ ihe nketa yist, a na-atụ aro Kit Kit DNA Yist (lyticase kwadebere n'onwe ya).
Kemgbe e guzobere ya, ụlọ ọrụ mmepụta ihe anyị na -emepụta ngwaahịa klaasị mbụ ụwa na ịgbaso ụkpụrụ
nke mma mbụ. Ngwaahịa anyị enwetala ezigbo aha na ụlọ ọrụ yana ntụkwasị obi bara uru n'etiti ndị ahịa ọhụrụ na ndị agadi ..