Operation Ọrụ ngwa ngwa: enwere ike nweta RNA n'ime nkeji iri atọ.
Urity Ịdị ọcha dị elu: akpụkpọ anụ silica na -ewepụ ọtụtụ adịghị ọcha na kọlụm mwepụ gDNA na -ekpochapụ DNA genomic.
Use Ojiji zuru oke: Kwesịrị ekwesị maka nlele dị iche iche dịka anụ ahụ, sel na nje.
Ụdị: Kọlụm ogho dabere
Sample na mbido olu: 10-20 mg anụ ahụ ma ọ bụ <107 sel
Ebumnuche: RNA
Oge ọrụ: ~ 30 min
Ngwa ala ala: RT-PCR/RT-qPCR, Northern Blot, Dot Blot, nhọrọ poly (A), ntụgharị in vitro, nnwale nchedo RNase, cloning molecular, wdg.
Enwere ike ịhazi ngwaahịa niile maka ODM/OEM. Maka nkọwa,biko pịa Ọrụ ahaziri (ODM/OEM)
RNA ewepụtara na nlele imeju 15 mg site na iji RNA Easy Fast Tissue/Cell Kit na ngwaahịa dị mkpa sitere na ndị na -eweta A na T. Olu olu: 100 μl; Oke mkpọtụ: 3 μl M: TIANGEN Marker D15000 Nsonaazụ nnwale: RNA Easy Tissue/Cell Kit nwere ọnụego mmịpụta dị elu karịa ngwaahịa dị mkpa sitere na ndị na -eweta A na T. |
A-1 Cell lysis ma ọ bụ homogenization ezughị
---- Belata ojiji nlele, mụbaa ọnụọgụ ihe nchekwa lysis, mụbaa homogenization na oge lysis.
A-2 Ego nlele buru oke ibu
---- Belata ọnụ ọgụgụ nlele ejiri ma ọ bụ mụbaa ọnụọgụ ihe nchekwa lysis.
A-1 lysis sel zuru oke ma ọ bụ homogenization
---- Belata ojiji nlele, mụbaa ọnụọgụ ihe nchekwa lysis, mụbaa homogenization na oge lysis.
A-2 Ego nlele buru oke ibu
---- Biko rụtụ aka na ikike nhazi kacha.
Apụghị A-3 RNA kpamkpam na kọlụm
---- Mgbe agbakwunyere mmiri RNase-Free, hapụ ya maka nkeji ole na ole tupu ịmịcha.
A-4 Ethanol dị na elu
---- Mgbe ịsachasịrị, centrifuge ọzọ wee wepụ ihe ịsa ahụ dịka o kwere mee.
A-5 ewepụghị usoro ọdịbendị kpamkpam
---- Mgbe ị na-anakọta mkpụrụ ndụ, biko gbaa mbọ hụ na ị wepụrụ usoro ọdịbendị ka enwere ike.
A-6 Mkpụrụ ndụ echekwara na RNAstore anaghị agbasasị nke ọma
---- njupụta ụlọ ahịa RNA karịrị nkezi ọdịbendị sel; yabụ ekwesịrị ịbawanye ike centrifugal. A na -atụ aro ka centrifuge na 3000x g.
A-7 Ọdịnaya RNA dị ala na ụba na nlele
---- Jiri nlele dị mma chọpụta ma ọ bụrụ na nlele ahụ kpatara obere mkpụrụ.
A-1 Ihe a abụghị nke ọhụrụ
---- Ekwesịrị idobe anụ ahụ ọhụrụ na nitrogen mmiri mmiri ozugbo ma ọ bụ tinye ya ozugbo na reagent RNAstore iji hụ na mmịpụta ahụ.
A-2 Ego nlele buru oke ibu
---- Belata ego nlele.
A-3 RNase mmetọn
---- Ọ bụ ezie na ihe nchekwa enyere na ngwa ahụ enweghị RNase, ọ dị mfe imetọ RNase n'oge usoro mwepụ yana ekwesịrị iji ya mee nke ọma.
A-4 mmetọ Electrophoresis
---- Dochie ihe nchekwa electrophoresis wee gbaa mbọ hụ na ihe ndị na-eri ihe na ihe nchekwa na-enweghị mmetọ RNase.
A-5 Oke oke maka electrophoresis
---- Belata ego nlele nlele, itinye nke ọma ọ bụla ekwesịghị ịfe 2 μg.
A-1 Ego nlele buru oke ibu
---- Belata ego nlele.
A-2 Ụfọdụ nlele nwere ọdịnaya DNA dị elu ma enwere ike iji DNase gwọọ ya.
Mee ọgwụgwọ DNase na-enweghị RNase na ntinye RNA enwetara, enwere ike iji RNA mee ihe maka nnwale ndị na-esote mgbe ọgwụgwọ gasịrị, ma ọ bụ ihe mkpocha RNA nwere ike mee ka ọ dị ọcha.
Maka iko iko, sie na 150 Celsius maka awa 4. Maka arịa plastik, mikpuru n'ime 0.5 M NaOH maka nkeji iri, wee jiri mmiri na-enweghị RNase sachaa ya nke ọma wee sterilaiz iji wepụ RNase kpamkpam. Ihe reagents ma ọ bụ azịza ejiri mee nnwale ahụ, ọkachasị mmiri, ga -abụrịrị enweghị RNase. Jiri mmiri na-enweghị RNase maka nkwadebe reagent niile (gbakwunye mmiri na karama iko dị ọcha, gbakwunye DEPC na mkpokọta ikpeazụ nke 0.1% (V/V), maa jijiji n'otu abalị na autoclave).
Kemgbe e guzobere ya, ụlọ ọrụ mmepụta ihe anyị na -emepụta ngwaahịa klaasị mbụ ụwa na ịgbaso ụkpụrụ
nke mma mbụ. Ngwaahịa anyị enwetala ezigbo aha na ụlọ ọrụ yana ntụkwasị obi bara uru n'etiti ndị ahịa ọhụrụ na ndị agadi ..